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NGS科研用建庫試劑盒
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K02422-S/L/L10 DNA Seq Library Preparation Kit – Illumina Compatible

流程介紹
       新一代Gnomegen DNA測序文庫構建試劑盒是在高通量測序領域中應用廣范的文庫構建產品,它可以實現各種來源的基因組DNA、大片段擴增子和mRNA逆轉錄形成的雙鏈cDNA的快速文庫構建,適用于Illumina平臺的高通量測序。

流程圖

特色與優勢
• 簡單,一步完成末端修復和加dA尾;
• 快速,整個流程僅需4-5小時;
• 自動化兼容,可實現自動化高通量建庫。
 
產品信息
 

貨號

產品名

規格

K02422-S

DNA Seq Library Preparation Kit – Illumina Compatible

12 rxn

K02422-L

DNA Seq Library Preparation Kit – Illumina Compatible

48 rxn

K02422-L10

DNA Seq Library Preparation Kit – Illumina Compatible

480 rxn


常見問題解答
 
1. DNA樣品制備整個流程需要多長時間?
      這是一個簡便的流程,一般6-8小時即可完成。
 
2. DNA文庫制備的注意事項有哪些?
      DNA文庫制備通常是一個成熟,優化過的流程。能出錯的地方不多。但因為步驟多,累積的回收率往往就是問題了。這就是我們的建庫流程盡量減少純化步驟的原因。
 
3. DNA文庫構建,對PCR循環數有要求嗎?
      這是一個在高通量測序應用中被反復討論的話題。我們的體會是:根據需要,沒有嚴格的規定。通常,PCR循環數越少越好,因為大家知道PCR會對樣品的組成帶來偏差。所以,建議用戶盡量選擇靈敏的定量方法,以減少PCR循環數。
 
4. DNA隨機斷裂有哪些方法?
       DNA隨機斷裂通常有物理斷裂和酶切兩大類。我們的體會是物理斷裂隨機性好,在一定范圍內,不太會受樣品的純度,初始量的影響,是比較理想的選擇。我們開發和優化了利用酶切法做DNA隨機斷裂的試劑和方法,這對于有經驗的用戶,是一個成本低,通量高的解決方式。
 
5. DNA文庫制備的起始量多少?
      建庫所需的DNA初始量是測序目的決定的:例如人的基因組,如果研究目的是尋找發生概率很低的和疾病相關的變異,則對測序的深度和DNA初始量有很高的要求。而如果是進行兩條染色體上同一位點,不同基因型的區分,則不需要前一種情況那么多的DNA樣品。除此之外,基因組的大小也是影響因素,通常小基因組,如微生物基因組,在很低的初始量下,也可以獲得很好的基因水平差異信息。通常情況,100ng到1ng的DNA,就可以產生足夠的文庫。DNA初始量更低,也是可以建庫成功的,只是得到的數據的覆蓋度會有差異。不同廠商的產品因為具體流程和效率有些不同,在相同DNA初始量的情況下,文庫產率也會有差別。
 
6. DNA Seq文庫制備的流程和IlluminaTruSeq有哪些不同?
      DNA Seq 文庫制備的流程和IlluminaTruSeq基本一樣,包括DNA隨機斷裂,末端修飾,加A尾,接頭連接,PCR擴增,以及純化并篩選所需大小的文庫片段幾個步驟。我們流程的特色在于將末端修飾,加A尾并為一步反應,將DNA建庫流程稍作簡化。
 
 
 

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